標(biāo)題：人乳頭瘤病毒16型納米抗體的篩選及鑒定
使用單位：山西省中醫(yī)藥研究院中心實(shí)驗(yàn)室2.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)羊駝生物工程實(shí)驗(yàn)室3.君研生物科技(山西)有限公司4.東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院醫(yī)學(xué)院
摘要：目的：構(gòu)建人乳頭瘤病毒16型（HPV16） L1蛋白納米抗體初級(jí)文庫(kù)，通過(guò)篩選鑒定獲得一株HPV16 L1特異性納米抗體。方法：以HPV 16 L1蛋白為抗原對(duì)羊駝進(jìn)行免疫，采用噬菌體展示技術(shù)構(gòu)建初級(jí)抗體文庫(kù)。經(jīng)3輪淘選，采用ELISA法鑒定陽(yáng)性克隆，將陽(yáng)性反應(yīng)最強(qiáng)克隆的VHH序列進(jìn)行真核表達(dá)。經(jīng)親和純化、凝膠過(guò)濾層析純化、SDS-PAGE和WB法鑒定，獲得目的納米抗體；采用表面等離子共振（SPR）技術(shù)檢測(cè)納米抗體與HPV 16 L1蛋白之間的親和力，CCK-8法檢測(cè)納米抗體對(duì)人永生化角質(zhì)細(xì)胞HaCat的毒性，熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測(cè)納米抗體對(duì)HPV 16假病毒的中和活性。結(jié)果：初級(jí)文庫(kù)庫(kù)容為1.304×1010，豐度為6.5×10～9個(gè)/mL,ELISA法鑒定獲得36個(gè)陽(yáng)性克隆。表達(dá)、純化獲得蛋白單體與二聚體，經(jīng)鑒定為目的納米抗體（命名為Nb）。Nb與HPV 16 L1蛋白結(jié)合的親和力為35.41 nmol/L。Nb實(shí)驗(yàn)組HaCat細(xì)胞增殖活力與空白組沒(méi)有顯著差異（P> 0.05）。與陰性組比較，0.1和1μmol/L Nb均能抑制假病毒感染293FT細(xì)胞（均P <0.01）。結(jié)論：成功獲得一株純度較好、親和力較高，對(duì)上皮細(xì)胞沒(méi)有明顯毒性作用、有效抑制HPV 16假病毒感染293FT細(xì)胞的納米抗體Nb，為防治HPV 16感染提供了有效的候選抗體類藥物。
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