【樣本要求】 樣本類型和采集 以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中,不得使用疊氮鈉做為防腐劑。 1、細胞培養(yǎng)上清:4000rpm 條件下離心 20min,去除細胞顆粒和聚合物,上清液保存在- 20℃以下,避免反復(fù)凍融。 2、血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,4000rpm 條件下離心 20min,小心地分離出血清,保存在- 20℃以下,避免反復(fù)凍融。 3、血漿:肝素,EDTA,或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在 4000rpm條件下,離心 20 分鐘取上清,血漿保存在-20℃以下,避免反復(fù)凍融。 4、組織:用預(yù)冷的 PBS (0.01 M,pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液,稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的 PBS(一般按 1: 9 的重量體積比,比如 1g 的組織樣品對應(yīng) 9 mL 的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在 PBS 中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,在冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎或反復(fù)凍融。最后將勻漿液 5000×g 離心 5-10 分鐘,取上清檢測。
樣本保存和穩(wěn)定性 樣本在 2-8℃條件下,可以儲存 72h,或者在- 20℃儲存 6 個月。樣本收集后,不是一次檢測完,請按一次用量分裝凍存,避免反復(fù)凍融,使用時在室溫下解凍,確保樣品均勻充分解凍。
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