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明膠酶譜法分析試劑盒配置溶液時需要注意哪些問題!
更新時間:2019-06-12   點擊次數:2184次

明膠酶譜法分析試劑盒配置溶液時需要注意哪些問題!

 

基質金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)以無活性的酶原形式分泌,活化后能夠降解細胞外基質的膠原蛋白,又稱膠原酶。通過影響細胞外基質,膠原酶參與胚胎發育、形態發生、組織重塑等過程,并參與炎癥、腫瘤、心血管、神經等許多疾病過程。血漿與組織中的MMP-2、MMP-9參與各種生理與病理過程,其在診斷和治療中的意義日益受到重視。

 

酶譜法的基本過程是先將樣品進行SDS-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE,含0.1%明膠)電泳分離,然后在有二價金屬離子存在的緩沖系統中使樣品中的MMP-2和MMP-9恢復活性,在各自的遷移位置水解凝膠里的明膠,后用考馬斯亮藍將凝膠染色,再脫色,在藍色背景下可出現白色條帶,條帶的強弱與MMP-2和MMP-9活性成正比。

 

明膠酶譜法分析試劑盒配置溶液時需要注意哪些問題!

 

溶液配制方法:


1. 染色液配方:0.25g 考馬斯亮藍R250+420ml 甲醇+100ml 冰乙酸,定容至1000ml,混合1h 后用
Whatman 1 號濾紙過濾,于室溫可無限期保存;

2. 脫色液配方:冰醋酸:甲醇:水=7:5:88(V:V:V);

3. 保存液:7%冰醋酸;

4. 凝膠染色之后,染色液可以回收利用,裝入新容器內,室溫或4 ºC 保存,可反復使用2-4 次。

 

相關文獻支持:

1. Nagase H and Woessner JF. Matrix Metalloproteinases. J Biol Chem, 1999, 274, 21491-21494

2. Heussen C, and Dowdle EB. Electrophoretic analysis of plasminogen activators in polyacrylamidegels containing sodium dodecyl sulfate and copolymerized substrates. Anal. Biochem,1980,102,196–202

3.綠茶多酚EGCG增強動脈粥樣硬化斑塊穩定性及其相關機制研究

 

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